在超低溫冰箱中存儲生物樣品的**佳實踐

雖然許多研究人員經常使用超低溫冰箱，但我們很少有人知道我們可以采取的所有措施來真正保護我們的樣品。2012年5月，哈佛腦組織資源中心（一家著名的腦庫）的超低溫冰箱失敗，損壞了世界上**大的自閉癥大腦樣本集合的三分之一。冷凍室外部溫控器讀數為-80°C，但內部溫度實際上是冰箱溫度。樣本的丟失嚴重阻礙了自閉癥的研究，強調了實施低溫保存**佳實踐的重要性。在本版本的Bench Tips中，我們建議您在超低溫冰箱中保存樣品的四個技巧。

建立冗余

大多數實驗室設有帶報警系統的冷凍柜，但無法安裝獨立的溫度監控器和適當的備用系統。McLean冰箱是哈佛大腦組織資源中心的24個冰箱之一，受到兩個獨立報警系統的保護。工作人員每天檢查兩次外部恒溫器，以確保組織樣本保持在-80°C。然而，隨著溫度的升高，外部恒溫器繼續讀取-79°C，因此無法觸發警報。

如果實驗室有獨立的溫度監控器連接到警報器，通過一個單獨的端口進入冷凍室，樣品可能已經不再使用。另一個好的投資是CO2或液氮備用系統。如果冷凍機出現故障，系統可以將氣體釋放到冷凍室，為您提供額外的時間將樣品轉移到功能單元。確保始終有一個容量相似的備用冷凍柜來容納轉移的樣品。

防止冷凍室燒傷

冷凍是一種復雜的現象，尚未完全理解。各種冰凍溫度產生不同種類的冰晶，其形成速度不同。在-80℃的環境中，形成穩定的六方晶體，但是進入和離開這種穩定的冷凍狀態是一個微妙的過程。通常，細胞越大，慢慢冷卻就越重要。即使對于更耐受的可滲透細胞，在環境溫度下每分鐘1℃的冷卻速率也是**佳的。預先添加冷凍保護添加劑（如DMSO或甘油）可以在冷凍過程中保護細胞免受溶質濃度增加和冰晶形成的影響。DMSO在細胞內冷凍之前促進細胞更大程度的脫水，而甘油是一種毒性較小的替代品。DMSO和甘油通常以??5％**10％（v / v）的濃度使用，但它們很少一起使用，除了植物細胞的研究。使用已知細胞類型的**高濃度來耐受和消毒試劑級溶液。相反，對于大多數細胞，應盡快使用37°C水浴進行解凍。

為細胞類型定制條件

細胞類型，細胞活力，生長條件和細胞的生理狀態只是在制備冷凍保存細胞之前評估的一些因素。在植物細胞中，**好從對數晚期收獲細胞并使用兩步冷卻過程 - 將細胞保持在-30℃一段時間，然后在-80℃冷凍。微生物細胞，特別是在充氣條件下生長的細菌和酵母，比未經充氣的細胞表現出更強的對冷卻和冷凍的有害影響的抵抗力。冷凍真菌孢子時，確保在冷凍前不發芽。通過細胞計數確定培養物冷凍前后的活力和估計恢復。計數的比較將表明您的技術成功。通常，**初存在的細胞數量越多，

積極組織

每個實驗室建立-80°C存儲協議非常重要。為所有未標記的樣本制定一個無例外的拋出規則。實驗室成員只有在將樣品編入中心位置后才能進入冷凍室，必須定期備份。

特別注意標簽。藍色**性標記傾向于褪色并在冰箱中變得難以辨認。直接寫在乙醇保存樣品上的信息幾乎不可避免地在聚丙烯管上消失。許多粘貼標簽在超低點下降; 在進行大規模購買之前測試幾種不同的類型。特別注意螺旋環頂部的墊圈，這些墊圈會隨著時間的推移而破裂。每年對所有儲存材料進行除霜和清潔可使記錄保持平直，并可能使實驗室無法購買另一臺冷凍機進行溢流。此外，請記住，大多數研究人員存儲在-80°C的習慣。請記住，溫度越低，消耗的能量越多。某些類型的樣品 - 微生物培養物，酵母和真菌 - 在-70°C儲存中很好。

作為建議的**后一句話，能源消耗過多的跡象 - 如冷凝，設備前面的水泄漏，過熱的房間和響亮的聲音 - 表明冰箱有問題。留意并定期進行維護; 這些步驟應該保證您的冰柜安全，您的樣品可以在未來幾年內保持活力。